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技術(shù)文章首頁 > 技術(shù)文章 詳細解析細胞膜熒光探針的樣本分析
  • 詳細解析細胞膜熒光探針的樣本分析
  • 點擊次數(shù):1070 更新時間:2021-11-19
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  •   細胞膜熒光探針用于標記肌肉膜,并且通過共聚焦激光掃描顯微鏡觀察染料可接近的膜。細胞膜完整性的喪失是由收縮活性引起的,使得內(nèi)膜的DiOC18(3)染色成為可能。由此產(chǎn)生的染色模式引人注目,細胞膜受損的纖維很容易與未受損的細胞膜區(qū)分開來。二十八烷基羰基酞菁高氯酸鹽是陽離子氧雜羰花青染料。已經(jīng)在含有卵磷脂酰膽堿(PC)的水性和非水性介質(zhì)以及不同性質(zhì)的不同溶劑中研究了二十八烷基羰花青菁(一種陽離子氧雜羰花青染料)的吸收和熒光光譜。結(jié)果表明,在PC中,染料在地面和激發(fā)態(tài)中形成復雜的證據(jù)。染料與PC的激發(fā)態(tài)相互作用表明電子從PC轉(zhuǎn)移到染料,這是由光電化學電池在光電化學電池中產(chǎn)生的,光電化學電池由染料和PC在水介質(zhì)中組成。
     
      細胞膜熒光探針的樣本分析:
      1、制備細胞膜熒光探針膜染色溶液:
      a、制備DMSO或EtOH儲備溶液:儲備溶液應在DMSO或EtOH中以1-5mM制備;
      b、準備工作溶液:將儲備溶液稀釋到合適的緩沖液中,如無血清培養(yǎng)基,HBSS或PBS,制成1至5mM的工作溶液。
     
      2、將細胞染成懸浮液:
      a、在染料工作溶液中懸浮細胞,細胞密度為1×106/mL;
      b、在37°C孵育2-20分鐘,培養(yǎng)時間取決于細胞類型。首先孵育20分鐘,然后優(yōu)化以獲得均勻的標記;
      c、將標記的懸浮管以1000至1500rpm離心5分鐘;
      d、去除上清液,輕輕地將細胞重新懸浮在預熱(37°C)的生長培養(yǎng)基中;
      e、按步驟c和d洗滌兩次。
     
      3、染色貼壁細胞:
      a、在無菌玻璃蓋玻片上培養(yǎng)貼壁細胞;
      b、從生長培養(yǎng)基中取出蓋玻片,去除多余的培養(yǎng)基。將蓋玻片放在濕度箱中;
      c、將100μL染料工作溶液吸到蓋玻片的角落,輕輕攪拌直至所有細胞都被覆蓋;
      d、將蓋玻片在37°C孵育2-20分鐘,培養(yǎng)時間根據(jù)細胞類型而變化。開始孵育20分鐘,然后優(yōu)化以獲得均勻的標記;
      e、排出染料工作溶液,用生長培養(yǎng)基清洗蓋玻片兩到三次。對于每個洗滌循環(huán),用預熱的生長培養(yǎng)基覆蓋細胞,孵育5-10分鐘,然后去除培養(yǎng)基。
     
      4、顯微鏡檢測:
      a、總結(jié)了DiD,DiO,DiI,DiS和DiR濾波器組的選擇。
      b、對于同時檢測多種染料,可提供如下多波段濾波器組:
     ?、?、DiI和DiO = Omega XF52,Chroma 51004
     ?、?、DiI和DiD = Omega XF92,Chroma 51007
     ?、?、DiI,DiO和DiD = Omega XF93,Chroma 61005
     
      5、流式細胞儀檢測:
      用細胞膜熒光探針標記的細胞可分別使用常規(guī)FL1,F(xiàn)L2,F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測通道進行分析。
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